■ 基本信息
啟動子: | Trc |
復制子: | pBR322 |
終止子: | rrnB T2 |
質粒分類: | 大腸桿菌載體；pTrc系列表達質粒 |
質粒大小: | 4414bp |
質粒標簽: | N-His，N-EK，N-Xpress |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度，37℃，有氧，LB |
表達宿主: | 大腸桿菌 |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測序引物: | pTrcHis-F: GAGGTATATATTAATGTATCG |
3'測序引物: | pTrcHis-R:GATTTAATCTGTATCAGG |
備注: | pTrc表達質粒 |
■ 質粒屬性
質粒宿主: | 大腸桿菌 |
質粒用途: | 蛋白表達 |
片段類型: | ORF
|
片段物種: | 空載體
|
原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
|
熒光標記: |
|
■ 質粒簡介
pTrcHis載體是來由pBR322質粒衍生而來的表達載體,設計用來在大腸桿菌中進行重組蛋白的高效表達和純化。載體上的Trc啟動子和rrnB抗終止區(qū)使得高水平蛋白表達成為可能.Trc啟動子由Trp啟動子的-35區(qū)域和Lac啟動子的-10區(qū)域共同組成。pTrcHis載體同時包含有一個LacIq基因，該基因編碼了Lac啟動子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉錄。進行蛋白表達時，大腸桿菌需要生長到對數(shù)生長期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，誘導表達。載體上pTrcHis載體是來由pBR322質粒衍生而來的表達載體,設計用來在大腸桿菌中進行重組蛋白的高效表達和純化。載體上的Trc啟動子和rrnB抗終止區(qū)使得高水平蛋白表達成為可能.Trc啟動子由Trp啟動子的-35區(qū)域和Lac啟動子的-10區(qū)域共同組成。pTrcHis載體同時包含有一個LacIq基因，該基因編碼了Lac啟動子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉錄。進行蛋白表達時，大腸桿菌需要生長到對數(shù)生長期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，誘導表達。載體上的迷你順反子結構能夠增強插入基因的轉錄水平，從而高水平表達目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達片段下游，在其上游有一個N-端融合表達多肽序列，該序列包含有ATG起始密碼子，6xHis標簽，T7噬菌體10號基因的翻譯增強子，X press抗原表位，腸激酶酶切識別位點的迷你順反子結構，能夠增強插入基因的轉錄水平，從而高水平表達目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達片段下游，在其上游有一個N-端融合表達多肽序列，該序列包含有ATG起始密碼子，6xHis標簽，T7噬菌體10號基因的翻譯增強子，X press抗原表位，腸激酶酶切識別位點。
■ 質粒圖譜
■ 質粒序列
質粒序列請下載：
ZK1611 pTrcHisA大腸表達質粒.txt
